ヒト血清中のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)の定量用。
方法
Karmenは1955年、リンゴ酸デヒドロゲナーゼとNADHを用いた速度論的測定法を開発した。 1960年にHenryが、1962年にAmadorとWackerが最適化された手順を発表した。 これらの改良は精度を高め、妨害物質の影響を低下させた。IFCCは1978年にP-5-Pを含む推奨法を発表した。 現在の方法はIFCCの勧告に基づいているが、ほとんどの検体にはAST活性の完全な回復に十分な量のこの補酵素が含まれているため、P-5-Pは含まれていない。
原理
アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)は、ラスパラギン酸からα-ケトグルタル酸へのアミノ基の転移を触媒し、シュウ酸およびL-グルタミン酸を生成する。 シュウ酸アセテートは、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ(MDH)触媒の指示薬反応において、NADHからNADへの酸化と同時に還元を受ける。 その結果、340nmにおける吸光度の減少率は、AST活性に正比例する。 血清中に通常存在する内因性ピルビン酸からの干渉を防ぐため、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)が添加される。
試薬調製
4部のR1試薬と1部のR2試薬を混合して作業試薬を調製する(例えば、200μLのR1と50μLのR2試薬)。
試薬の劣化
以下の場合は試薬を使用しないでください:
1.340nmの吸光度が1,0未満の場合。
2.試薬の性能パラメータを満たしていない。
必要であるが提供されていない材料
1.正確なピペッティング器具
2.試験管/ラック
3.タイマー。
4.340nmで読み取り可能な分光光度計。紫外
5.加熱バス/ブロック(37℃)。
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