Ponceaus S Staining Solutionは、ウェスタンブロットの転写効率を評価するための、すぐに使えるメンブレン染色液です。この染色液は、ニトロセルロースまたはPVDF膜上のタンパク質を迅速かつ可逆的に染色するために推奨されます。ポンソーS染色は可逆的で、0.1% NaOHで短時間インキュベートすることで除去できます。
ポンソーS溶液は、ニトロセルロースやPVDFメンブレン上の総タンパク質量や転写効率の評価に使用できる。PVDFメンブレンはポンソーSで5分間染色し、ddH2Oで3分間洗浄する。目に見えるピンク色のバンドが得られる。
レーン1, 13: プレステインドプロテインラダー #PM019-0500
レーン2-7:未染色プロテインラダーの2倍希釈液 #PMU12-0500
レーン8-12:2000、1000、500、100、50 ngのBSA
必要な材料(提供されていないもの
容器:ゲル染色用ボックス
シェーカー:オービタルまたはロッキングシェーカー
反応セットアップ
SDS-PAGEゲルをニトロセルロースまたはPVDFメンブレンに転写した後、転写したメンブレンを染色用容器に入れる。
メンブレン全体を覆うのに十分な量のPonceau S Protein Staining Solutionにメンブレンを浸す。室温で5~15分間、染色容器を軽く撹拌する。タンパク質のバンドが染色され、5~15分で見え始める。
タンパク質バンドが透明になるまで、メンブレン上の過剰な染色を純水で洗い流す。
さらにメンブレンをブロッキングするために、メンブレンを20mlの0.1%NaOHに1~2分間入れてメンブレンからポンソーS染色溶液を除去し、その後純水で1~2分間すすぐ。
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