Titan HotTaq DNA Polymerase(図1)は、Titan Taq DNA Polymeraseを改良したものです。常温ではポリメラーゼ活性を持たない不活性な状態です。Titan HotTaq DNA Polymeraseは95-97℃で15分間インキュベートすることで活性化し、非特異的にアニールされたプライマーやPCRセットアップ中に低温で形成されたプライマーダイマーの伸長を防止します。この酵素は、5'から3'の重合依存的なエキソヌクレアーゼ置換活性を持つが、3'から5'のエキソヌクレアーゼ活性は欠いている。TAクローニングを可能にする "エクステンダーゼ活性 "を有している。
濃縮する:5単位/μl
ユニットの定義74℃、30分間で10nmolのdNTPの酸不溶性体への取り込みを触媒するのに必要な酵素量を1単位と定義する。
出典Thermus aquaticus DNA Polymeraseの改変遺伝子を含む過剰生産プラスミドを有する大腸菌株から精製した。
品質管理をしています:酵素は、ニッキングやプライミング活性、エキソヌクレアーゼ、非特異的エンドヌクレアーゼを含まない。SDS/PAGE - 95 kDバンド、>98%の純度。サーモサイクルを用いて活性と安定性をテスト。1サイクルあたりのヌクレオチドあたりのエラーレートは~2.5 x 10-5、精度は~4 x 104です。95℃での推定半減期は1.5時間。
保存と希釈用バッファー:50%グリセロール(v/v)、20 mM Tris-HCl pH 8.7 at 25℃、100 mM KCl、0.1 mM EDTAおよび安定化剤。
付属しています:
10x Reaction Buffer 1 (Mg2+, detergent free) Tris-HCl and (NH4)2SO4
10x Reaction Buffer 2 (Mg2+ free) Tris-HCl, (NH4)2SO4 および洗浄剤
25mM MgCl2
10x Enhancer - 難易度の高いテンプレート(GCリッチなDNAテンプレートなど)の増幅を促進する添加剤です。
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