DNAライブラリーの準備試薬キット 3010 series

酵素緩衝液重亜硫酸塩転換

Bisulfite seqはDNAメチル化を検出する技術としてよく知られており、全ゲノムDNAメチル化解析にはWGBS、RRBS、MeDIP-Seq、MSBSなどの技術が用いられている。DNAメチル化は、分子生物学、遺伝学、エピジェネティクスにおいて、細胞の発生、分化、遺伝子発現の制御に重要である。メチル化されたシトシンのほとんどはCpG部位に存在し、シトシンの70-80%がメチル化されている。ヒトゲノムのCpG部位数は約2,800万個であり、ゲノムの4.4％がメチル化されていると予想されているのに対し、1％未満である。 全ゲノムバイサルファイトシーケンス（WGBS）は、DNAメチル化解析の最も効果的な方法である。唯一の制限は、非メチル化領域も含めて全ゲノムの塩基配列を決定するため、塩基配列決定コストが非常に高いことである。 Reduced Representation Bisulfite Sequencing (RRBS)は、メチル化CpG部位のごく一部を縮小したものである。RRBSは、制限酵素消化とバイサルファイトシークエンシングを組み合わせ、メチル化CpG部位を濃縮します。全ゲノムのメチル化パターンを1塩基レベルで推定する効率的な技術である。メチル化CpG部位の10%しかカバーできない。 Methylated DNA Immunoprecipitation Sequencing（MeDIP-Seq）は、メチル化DNAの選択に用いられるもう一つの全ゲノム濃縮技術である。5-メチルシトシンに対する抗体を用い、免疫沈降法により全ゲノムDNAからメチル化DNAを濃縮する。5-メチルシトシン抗体は断片化したゲノムDNAとインキュベートして沈殿させ、その後DNAを精製して塩基配列を決定する。