DRG C5a ELISA キットは、サンドイッチ原理に基づく固相酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA) です。
モノクローナル抗体と補体因子C5との交差反応性のため、分析前にサンプル中のC5を沈殿により除去します。得られた透明な上清には測定対象となるC5aが含まれています(10,11)。最初のインキュベーションで、サンプル中のC5aは、マイクロ滴定プレート表面に付着しているマウス抗C5aモノクローナル抗体(mab 561)と結合する。その後、未結合成分を洗浄により除去し、2回目の反応でペルオキシダーゼ結合モノクローナル抗体(Mab 557)を加え、C5a上の別のエピトープに結合させる。過剰な酵素結合抗体は洗浄によって除去され、結合した酵素活性が測定される。過酸化水素とクロモジンの酵素反応は、希硫酸の添加により停止される。
C5a の濃度に比例する色の強さは、光度的に決定される。
ヒト血漿または尿中のアナフィラトキシンC5aを定量的に測定するための酵素免疫測定法です。補体系は20種類以上のタンパク質から構成され、侵入した微生物に対する防御システムとして進化してきました。また、様々な疾患状態や医療機器、薬剤との接触によっても活性化されます(1)。活性化されると、タンパク質分解酵素のカスケードによって、アナフィラトキシンC3a、C4a、C5aがそれぞれの前駆体から放出される(2)。これらのフラグメントは、ヒスタミン放出、平滑筋収縮、毛細血管透過性の増加、免疫調節など、様々な生物学的機能を発揮する(3)。
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