腫瘍学検査キット EG-90068-NGS

胃腸疾患遺伝子用血液

EliGene® NGS キットは、目的の遺伝子の必要なターゲット領域すべてをマルチプレックス PCR 増幅することができます。各マルチプレックスPCR反応に推奨されるDNA量は、ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）材料または血液由来のDNA20～100 ngである。次に、得られたアンプリコンをMID配列でバーコード化し、サンプルごとに混合する。このサンプルは、製造元の指示に従って、超並列シーケンス（MPS）用のNGS装置Illuminaを用いて定量され、シーケンスされる。得られた配列リードはその後、標的遺伝子の参照配列と比較して解析され、バリアント位置が同定される。 はじめに EliGene® NGS キットは、1 サンプル中の標的領域の増幅をもたらす 1 回以上のマルチプレックス PCR 反応に使用されます。増幅には、ホットスタートDNAポリメラーゼを含むすぐに使えるマスターミックスが使用されます。各マルチプレックスのアンプリコンは100倍に希釈される。第2ステップでは、EliGene® Adaptor-IL NGSキットを用いて第2ラウンドのPCRを行い、イルミナMiSeqシーケンスに必要なMIDとp7およびp5アダプターを組み込むために、すべてのアンプリコンのタグ付けを可能にします。得られたタグ付きアンプリコンは、事前に定義されたアッセイ固有の混合スキームに従って、個体ごとに混合されます。各アンプリコンライブラリーはその後、150bp未満の小さな残存DNA断片から精製され、濃度標準を用いたReal-Time PCRを用いてDNA濃度が決定されます。