2次元ゲル電気泳動を行う前に考慮すべき最も重要なことの1つは、タンパク質可溶化バッファーの選択である。適切なバッファーは、タンパク質のネイティブな電荷を乱すことなく、効果的にタンパク質を可溶化する必要がある。
一般的なカオトロープである尿素は、タンパク質の可溶化と変性に広く使用されている。尿素の欠点はカルバミル化である。水中では尿素はシアン酸アンモニウムと平衡状態にあり、温度とpHの上昇に伴ってその濃度が上昇する。シアネートはタンパク質のα-アミノ基やε-アミノ基と反応し、タンパク質の等電点変化を誘発する。このため、アーチファクトな結果が得られる。したがって、カルバミル化は避けなければならない。
カルバミル化のリスクを最小限に抑えるには、尿素系試薬を使用前に新鮮な状態で調製することです。ジービオサイエンスは尿素ベースの乾燥可溶化バッファーを開発し、あらかじめ混合してすぐに使えるようにしています。乾燥バッファーは、付属の脱水バッファーを適量加えるだけです。IEF/2Dゲル電気泳動の時間を短縮し、品質を向上させることができます。
FOCUS™ Extraction Bufferは、IPGストリップの補水用バッファーとしても使用できるように設計されています。
FOCUS™ Extraction Buffers は、尿素、チオ尿素、Nonidet® P-40、CHAPS、スルホベタインなどの重要な緩衝剤および安定化剤の濃度を実験的に最適化したものです。FOCUS™ Extraction Buffersは、2Dゲル解析において最適なタンパク質抽出とスポット分解能の向上を実現するために設計されています。
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