酵素試薬 A018 series

UNG酵素RT-qPCR用細菌

熱発生UDG酵素（ウラシル-DNAグリコシラーゼ）をスクリーニングし、ラボで育てたバクテリアから抽出・精製し、大腸菌由来のUNGと同様に、一本鎖または二本鎖DNA中のウラシル-グリコシド結合を加水分解してウラシルを切除し、DNA中にアルカリ感受性のある非基線部位を生成する。この無塩基部位は、核酸エンドヌクレアーゼや加熱、アルカリ処理によって加水分解され、大腸菌由来のUNGとは異なり、熱安定性が低いため、酵素が失活しやすくなる。DNAの調製方法に応じて、UDG酵素を使用することで、一般的な部位特異的または鎖特異的なU-DNA切断を実現することができる。 ユニットの定義 精製した一本鎖ウラシルDNA（M13）1μgを37℃で60分以内に完全に分解するのに必要なウラシルDNAグリコシラーゼの量を1ユニットと定義する。【製品特徴 一本鎖および二本鎖DNA上のU-DNAサイトを加水分解し、ウラシル配糖体結合を切除し、DNA中にアルカリ感受性の無塩基サイトを生成することができる。 一本鎖、二本鎖DNAのいずれにも活性を示す。 ウラシルを自然に含まないRNAやDNAには不活性です。 金属イオンに対する要求がなく、EDTAの存在下で完全に活性化する。ただし、100mM K+またはNa+を超える系での残存活性は元の活性の約70％であり、使用量の増加が必要である。 最適な反応温度は37℃ですが、20～50℃の広い範囲でより良い活性を示し、95℃では2分で完全に不活性化できます。 PCRでの推奨使用量は0.2U-1U/25μl、ワンステップRT-qPCRや55-65℃での推奨使用量は0.2U/25μl以下である、