研究用検査キット LS-K268

総タンパクATPアデノシン一リン酸

5-AMP活性化プロテインキナーゼ（AMPK）は、細胞内エネルギーバランスの重要なセンサーである。AMPKは、筋収縮、飢餓、低酸素など多くの要因によって引き起こされるAMP/ATP比の上昇に反応して活性化される。AMPKは、α-(63 kDa)、β-(38 kDa)およびγ-(38 kDa)サブユニットからなるヘテロ三量体タンパク質複合体である。それぞれのサブユニットについて、アイソフォームが同定されており（アルファ-1、アルファ-2、ベータ-1、ベータ-2、ガンマ-1、ガンマ-2、ガンマ-3）、理論的には12種類のタンパク質を形成することができる。αサブユニットにはセリン/スレオニンキナーゼドメインがあり、制御サブユニットにはAMPとATP、グリコーゲンの結合部位がある。AMPKは触媒ドメイン内のThr-172のリン酸化によって活性化される。AMPが結合すると、AMPK活性は基底レベルと比較して2～5倍上昇する。AMPがαサブユニットに結合すると、キナーゼのアロステリックな活性化が起こり、キナーゼドメインの構造変化が誘導され、Thr-172の脱リン酸化からAMPKを保護する。この細胞ベースのELISAは、全細胞中のリン酸化AMPKを測定し、シグナルを総タンパク質量に対して正規化する。抗体は両方のαサブユニットを認識するため、あらゆる組織（ヒト、マウス、ラット）の細胞に使用できる。このシンプルで効率的なアッセイは、細胞溶解液の調製が不要であり、短期および長期のアッセイでAMPK制御の研究に使用できる。このアッセイでは、96ウェルプレートで増殖させた細胞をウェル内で固定し、透過処理する。AMPKリン酸化（pAMPK）は、蛍光ELISAを用いて測定した後、各ウェルで総タンパク質を測定する。