ビリルビンはジアゾ化スルファニル酸によって着色アゾビリルビンに変換され、光度計で測定される。血清中の2つのビリルビン画分-ビリルビン-グルクロニドとアルブミンに結合した遊離ビリルビン-のうち、前者だけが直接反応し、遊離アルブミンは促進剤によってタンパク質から置換された後に反応する。総ビリルビン(促進剤あり)と直接ビリルビン(促進剤なし)の2つの測定値の差から、間接ビリルビンを計算することができる。
直接 "ビリルビンおよび "間接 "ビリルビンという用語は、促進剤または可溶化剤の存在下または非存在下での反応特性のみを指し、2つのビリルビン分画の近似等価物に過ぎない。
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