直接ビリルビン(抱合型)は、スルファミン酸の存在下でジアゾニウム塩2,4-ジクロロフェニルジアゾニウム(2,4-DPD)と反応してアゾビリルビンを形成し、この着色錯体は546nmで光度測定できる。血清中の2つのビリルビン画分-ビリルビン-グルクロニド(抱合型)とアルブミンに結合した遊離ビリルビン(非抱合型)のうち、前者だけが直接反応し、遊離ビリルビンは促進剤によってタンパク質(アルブミン)から遊離した後に反応する。2つの測定値の差:総ビリルビン(促進剤あり)と直接ビリルビン(促進剤なし)により、間接ビリルビンを計算することができる。直接 "と "間接 "ビリルビンという用語は、促進剤や可溶化剤の有無における反応特性のみを指し、2つのビリルビン分画のおおよその等価値に過ぎない。
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