特定の研究課題に対する機能的分析への道を開く。
使用目的
この FluoroSpot Path キットは、FluoroSpot アッセイを用いて、SARS-CoV-2(Spike および RBD)に反応し、ヒト IgG を分泌する B 細胞を定量することを目的としています。抗原特異性に関係なくIgGを分泌するB細胞(total IgG)も測定可能です。研究用のみ。診断には使用できません。
メモリーB細胞については、R848および遺伝子組換えヒトIL-2(いずれも付属)による前刺激を推奨します。
性能
COVID-19回復期のヒトPBMCをR848+IL-2(メモリーB細胞を刺激)と共にチューブ内で3日間インキュベートした。その後、細胞を広範囲に洗浄し、抗ヒトIgG mAbsをコートしたFluoroSpotプレート(250,000細胞/ウェル)に添加した。スパイク特異的IgGスポットは、Spike-GAL、すなわちGALペプチドタグを有する組換えスパイクタンパク質、次いで抗GAL-490で検出した。RBD特異的スポットは、RBD-WASP、すなわちWASPペプチドタグを有する組換え型Receptor Binding Domainタンパク質、次いで抗WASP-640で検出した。スポットはMabtech IRISで解析した。
分析対象
免疫グロブリンG(IgG)は血清中で最も豊富なIgアイソタイプであり、血清免疫グロブリン全体の約80%を占める。ヒトでは、免疫グロブリンGには4つのサブクラスがあり、血清中濃度はIgG1が最も高く、次いでIgG2、IgG3、IgG4と続きます。マウスでは、IgGサブクラスはIgG1、IgG2a/c、IgG2bおよびIgG3と定義される。IgG分子は2本の重鎖および2本の軽鎖(κまたはλ)から構成され、抗原結合のための2本の腕を持つ分子になる。
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