特定の研究課題に対する機能的分析への道を開く。
使用目的
この FluoroSpot Path キットは、FluoroSpot アッセイを用いて、結核ペプチドに応答してヒト IFN-γ および IL-2 を分泌する細胞を定量することを目的としています。研究用のみ。診断には使用できません。
ペプチドプールの組成
スキャニングプールは、完全なタンパク質をカバーする、11個のアミノ酸がオーバーラップした15量体の合成ペプチドで構成されています。ESAT-6スキャニングプールは、早期分泌抗原性標的タンパク質に由来し、21個のペプチドを含んでいます。CFP-10スキャニング・プールは培養濾液タンパク質に由来し、23個のペプチドを含む。最後に、EspCスキャニングプールはESX-1分泌関連タンパク質に由来し、23ペプチドを含む。
パフォーマンス
潜伏結核患者由来のヒトPBMC(250,000細胞/ウェル)を、ESAT-6およびCFP-10スキャニングプール(Mabtech社製)の非存在下または存在下で一晩インキュベートした。IFN-γおよび/またはIL-2を分泌する細胞数をFluoroSpotで分析した。単一サイトカイン分泌細胞だけでなく、二重分泌細胞も測定した。LED490,FITC(IFN-γ)とLED550,Cy3(IL-2)を重ね合わせた画像で可視化した二重分泌細胞からのスポットを同定するためにスポットセンターを用いた。スポット解析はMabtech IRISで行った。
IFN-γ
分析対象
インターフェロン-γ(IFN-γ)は唯一のII型インターフェロンである。この炎症性サイトカインは、活性化T細胞およびNK細胞によって分泌される。マクロファージや内皮細胞を活性化し、APC、T細胞、B細胞に影響を与えることで免疫応答を制御する。ヘルパーT細胞および細胞傷害性T細胞によるIFN-γの産生は、Th1型表現型の特徴である。
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