特定の研究課題に対する機能的分析への道を開く。
使用目的
この FluoroSpot Path キットは、FluoroSpot アッセイを用いて、SARS-CoV-2 (RBD) に応答してヒト IgG を分泌する B 細胞を定量することを目的としています。抗原特異性に関係なくIgGを分泌するB細胞(total IgG)も測定可能です。研究用のみ。診断には使用できません。
メモリーB細胞については、R848および遺伝子組換えヒトIL-2(いずれも付属)による前刺激を推奨します。
性能
COVID-19回復期のヒトPBMCを、R848+IL-2(メモリーB細胞を刺激する)の存在下および非存在下で、チューブ内で3日間インキュベートした。その後、細胞を広範囲に洗浄し、抗ヒトIgG mAbsをコートしたFluoroSpotプレート(200,000細胞/ウェル)に添加しました。RBD特異的スポットは、RBD-WASP、すなわちWASPタグを持つリコンビナントReceptor Binding Domainタンパク質、次いで抗WASP-640で検出した。スポットはMabtech IRISで解析した。
分析対象
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免疫グロブリンG(IgG)は血清中で最も豊富なIgアイソタイプであり、全血清免疫グロブリンの約80%を占める。ヒトでは、免疫グロブリンGには4つのサブクラスがあり、血清中濃度が最も高いのはIgG1、次いでIgG2、IgG3、IgG4である。マウスでは、IgGサブクラスはIgG1、IgG2a/c、IgG2b、IgG3と定義されている。IgG分子は2本の重鎖と2本の軽鎖(κまたはλ)から構成され、抗原結合のための2本の腕を持つ分子になる。抗原に対する典型的な免疫反応では、最初のIgM反応に続いて高レベルのIgG抗体が誘導される。
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