Ampli1 WGA PLUS Kitは、単一ヒト細胞の全DNA量をバランスよく完全に増幅するために開発・最適化されました。
入力DNA(1μIのPBS中、1個の細胞および最大1000個の細胞から)は、新鮮/生細胞および/または固定細胞(PFA2%、CellSave、CellRescueチューブ)から得ることができる。このキットは、最大10 ngのゲノムDNA(組織やFFPEサンプルなど)の増幅にも使用できる。
細胞溶解後、DNAを制限酵素で消化し、アダプターをDNA断片にライゲーションする。 これにより、ゲノム上のどの遺伝子座についても、対応する対立遺伝子が同じ長さでGC含量がほぼ同じゲノム断片として増幅されるため、元のDNA分子の増幅効率の違いによる対立遺伝子の脱落が劇的に減少する。増幅は同じチューブ内で行われ、すべての断片に対して単一の特異性の高いユニバーサルPCRプライマーが介在し、標準的なTaq DNAポリメラーゼよりも6.5倍高い忠実度を持つ、3'→5'エキソヌクレアーゼ証明活性を持つDNAポリメラーゼを使用する。
Ampli1 WGAプロトコルの出力は、全ゲノムを代表する約0.2-2 kbのフラグメントからなるバランスのとれたライブラリーである。
Ampli1 WGA PLUS製品は、サンガーまたは次世代シーケンサー(NGS)によるバリアント検出、マイクロサテライトまたはその他のPCRベースのジェノタイピング解析、メタフェーズCGH、アレイCGH、NGSによるゲノム全体のコピー数解析など、多くの異なるタイプのダウンストリーム解析手順に対応しています。
Ampli1 OncoSeek PanelとAmpli1 LowPass Kit for Illuminaの2種類の専用ダウンストリームキット、
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