基質アデノシン-5'-一リン酸(AMP)から5'-リン酸基を加水分解する能力によって測定される。オルトリン酸生成物はマラカイトグリーンリン酸検出キットで測定する。記載の条件下で測定したところ、比活性は12,500pmol/min/μg以上であった。
N末端配列
解析 - Trp27
予想分子量 - 85 kDa
SDS-PAGE - 還元条件下で84-93 kDa。
キャリアフリー
CFとは?
CFはキャリアフリー(CFarrier Free)の略です。当社では通常、組換えタンパク質にキャリアタンパク質としてウシ血清アルブミン(BSA)を添加しています。キャリアタンパク質を添加することで、タンパク質の安定性を高め、保存性を向上させ、組換えタンパク質をより希薄な濃度で保存することができます。キャリアフリーバージョンはBSAを含みません。
どのような製剤が適していますか?
一般的には、細胞培養や組織培養、あるいはELISA標準品として使用する場合は、BSA入りの組換えタンパク質を購入することをお勧めします。一方、キャリアフリーのタンパク質は、BSAの存在が邪魔になるような用途にお勧めします。
測定手順
材料
アッセイバッファー25 mM Tris、5 mM MgCl2、pH 7.5
リコンビナントヒト5'-ヌクレオチダーゼ/CD73 Fcキメラ(rhCD73/mFc)
基質基質:アデノシン一リン酸(AMP)、脱イオン水中5mMストック
マラカイトグリーンリン酸検出キット
96ウェルクリアプレート
吸光度読み取り機能付きプレートリーダー
1 M リン酸塩標準液 10 µL をアッセイバッファー 990 µL に加えて 10 mM ストックとし、1 M リン酸塩標準液から標準曲線を作成します。続けて、10 mM リン酸塩ストック 10 µL をアッセイバッファー 990 µL に加えて 100 µM ストックとします(これは標準として使用する最初の希釈液です)。
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