世界各地のラボにおいて、消化プロトコルを簡素化し、分析のスループットを改善する試みが行われています。ウォーターズの特許取得済み RapiGest SF 界面活性剤は、ラボの効率を高めることを念頭に置いて設計されており、タンパク質消化にかかる時間が大幅に減少し、質量分析(MS)に適合した同日中の消化が可能になります。
RapiGest SF により、タンパク質酵素消化の速度と回収率が高まります。この特許取得済みの陰イオン界面活性剤により、トリプシン、Asp-N、Glu-C、Lys-C、PNGase F など、プロテアーゼによる溶液中でのペプチド生成が加速します。疎水性の高いタンパク質の多くは、切断部位にエンドプロテアーゼがアクセスできないため、タンパク質分解に耐性を示します。RapiGest SF により、タンパク質分解耐性のタンパク質の消化が促進され、疎水性の高いタンパク質およびペプチドの可溶化が促進されます。RapiGest SF は MS に適したマイルドなタンパク質変性剤で、これによってタンパク質の可溶化とアンフォールドが促進されるため、従来の変性剤のように一般的なタンパク質分解酵素を変性または阻害することなく、タンパク質が切断されやすくなります。このため、高価なエンドプロテアーゼの使用量を減らすことができます。
概要
液体クロマトグラフィー(LC)および MS 分析に適合
同日に消化および分析が可能
化後のサンプル前処理が最小限あるいは不要に
消化の効率と速度が向上
消化プロトコルが簡素化し、分析のスループットが改善
従来の変性剤とは異なり、酵素活性が阻害されない
エンドプロテアーゼ活性を抑制しないため、高価なエンドプロテアーゼの使用量低減が可能に
RapiGest SF 界面活性剤の作用原理
RapiGest SF 界面活性剤はマイルドな変性剤であり、基質タンパク質を溶解・アンフォールドして切断されやすくします。マイルドなタンパク質変性によりタンパク質構造が開き、タンパク質分解酵素作用部位が露出します。球状タンパク質のより複雑な変性においても、RapiGest SF 溶液の温度を上げることで、このような状態にすることができます。