循環血中25-ヒドロキシビタミンD(25-OH-D)は、ビタミンDの状態を示す最良の指標として広く認識されている。血中では、ビタミンDの主要な代謝物として25-OHビタミンD3と25-OHビタミンD2の2種類があります。 25-OH-D3は主に日光により皮膚で生成されるビタミンD3に由来し、25-OH-D2は食事中の植物に由来します。現在、25-OH-Dを測定する方法として、クロマトグラフィーによる分離後、非免疫学的に直接検出する方法と競合型イムノアッセイに大別されます。イムノアッセイの多くは、25-OHビタミンD2と25-OHビタミンD3の両方を一緒に検出できる抗体を用いており、合計の結果が得られます。しかし、25-OHD2が検出される割合はまちまちです。
現在、直接検出する非免疫法として、高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)と液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析計(LC-MS/MS)の2つの方法があります。クロマトグラフィー法は、25-OH-D2と25-OH-D3を独立して測定することができ、精度、感度ともに優れています。
一方、市販のイムノアッセイでは、ビタミンD2とビタミンD3の代謝物を分離して測定しないため、総ビタミンD測定の精度が低いという研究論文も多くあります。臨床検査室における25-OH-D測定は、25-OH-D2と25-OH-D3を同等に測定し、25-OH-Dの合計値を報告することが推奨される。イムノアッセイは25-OH-Dの総量(25-OH-D3と25-OH-D2)を測定しますが、25-OH-D2と25-OH-D3の交差反応は52〜100%と測定法毎に異なります。
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