O ABScript II cDNA First Strand Synthesis Kit inclui duas misturas optimizadas, ABScript II Enzyme Mix e ABScript II Reaction Mix. A mistura de enzimas combina a transcriptase reversa ABScript II e o inibidor de RNase, e a mistura de reacção contém um tampão optimizado. A Transcriptase Reversa ABScript II é uma transcriptase reversa M-MuLV recombinante com actividade reduzida de RNase H e maior termoestabilidade. Pode ser utilizada para sintetizar cADN de primeira cadeia a temperaturas mais elevadas do que o M-MuLV de tipo selvagem. A enzima é activa até 48°C, o que proporciona uma maior especificidade e um maior rendimento do cDNA.
O kit também fornece dois primers optimizados para transcrição reversa e água sem nuclease. Um iniciador Oligo-dT ancorado [d(T)23VN] força o iniciador a recozer no início da cauda polyA. A mistura optimizada de primers aleatórios fornece locais de priming aleatórios e consistentes que cobrem todos os modelos de ARN, incluindo ARNm e ARN não poliadenilados. O produto de cDNA da primeira cadeia gerado é de até 10 kb.
Características do produto
A baixa actividade da RNase H é benéfica para a síntese de cDNA de fragmentos longos, que pode sintetizar cDNA até 10 KB.
A temperatura ótima da enzima foi de 42 ℃ e a enzima ainda tem alta atividade a 48 ℃.
O rendimento específico de cDNA foi maior do que o da transcriptase reversa M-MLV comum (37 ℃).
Adequado para detecção de coronavírus;
Com uma variedade de primers RT, tanto o mRNA quanto o ncRNA podem ser usados como modelos de transcrição reversa.
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