o "Molgen DNA Mycoplasma genitalium S1 Kit" é um kit de ensaio para a deteção do ADN do Mycoplasma genitalium por PCR em tempo real.
Introdução
o "Molgen DNA Mycoplasma genitalium S1 Kit" destina-se à deteção do ADN do Mycoplasma genitalium em amostras clínicas (saliva, urina, esfregaços de células epiteliais) utilizando o método de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real com deteção fluorescente do produto amplificado.
O kit está validado para utilização com cicladores de PCR de tipo bloco: iQ5 iCycler, CFX96 (Bio-Rad, EUA), DT-96 (DNA-Technology, Rússia).
A extração de ADN pode ser efectuada utilizando o "Molgen Universal Extraction Kit".
Quando se utilizam kits de extração de ADN de outros fabricantes, recomenda-se vivamente a utilização da amostra de controlo interno (IC) fabricada pela Adaltis.
O kit contém os reagentes necessários para 96 testes, incluindo amostras de controlo.
Princípio do método
A PCR em tempo real baseia-se na deteção da fluorescência produzida por uma molécula repórter, que aumenta à medida que a reação prossegue. A molécula repórter é uma sonda de ADN com marcação dupla que se liga especificamente à região alvo do ADN dos agentes patogénicos. O sinal de fluorescência aumenta devido à separação do corante de fluorescência e do supressor pela atividade da exonuclease da Taq DNA-polimerase durante a amplificação. A PCR consiste em ciclos repetidos: desnaturação do ADN à temperatura, recozimento do iniciador e síntese da cadeia complementar.
O valor do ciclo limiar (Ct) é um número de ciclos em que a fluorescência gerada numa reação ultrapassa o limiar e o sinal de fluorescência aumenta significativamente acima do fundo. O aumento do sinal deve-se à utilização de uma sonda de hibridação de ADN específica para a sequência de ADN em causa
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