o "Molgen DNA Neisseria gonorrhoeae S1 Kit" é um kit de ensaio para a deteção do ADN da Neisseria gonorrhoeae pelo método de PCR em tempo real.
Introdução
o "Molgen DNA Neisseria gonorrhoeae S1 Kit" destina-se à deteção do ADN da Neisseria gonorrhoeae, extraído de amostras clínicas (zaragatoas de células epiteliais, sémen, fluido prostático, urina), utilizando o método da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real com deteção por fluorescência do produto amplificado
O conjunto 1 destina-se a ser utilizado com cicladores de PCR de tipo bloco: iQ5 iCycler, CFX96 (Bio-Rad, EUA), DT-96 (DNA-Technology, Rússia).
A extração de ADN pode ser efectuada utilizando o "MOLgen Universal Extraction Kit";
Quando se utilizam kits de extração de ADN de outros fabricantes, recomenda-se vivamente a utilização da amostra de controlo interno (IC) fabricada pela Adaltis.
O conjunto 1 contém os reagentes necessários para 96 testes, incluindo amostras de controlo.
Princípio do método
A PCR em tempo real baseia-se na deteção da fluorescência produzida por uma molécula repórter, que aumenta à medida que a reação prossegue. A molécula repórter é uma sonda de ADN com marcação dupla que se liga especificamente à região alvo do ADN dos agentes patogénicos. O sinal de fluorescência aumenta devido à separação do corante de fluorescência e do supressor pela atividade da exonuclease da Taq DNA-polimerase durante a amplificação. A PCR consiste em ciclos repetidos: desnaturação do ADN à temperatura, recozimento do iniciador e síntese da cadeia complementar.
O valor do ciclo limiar (Ct) é um número de ciclos em que a fluorescência gerada numa reação ultrapassa o limiar e o sinal de fluorescência aumenta significativamente acima do fundo.
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