o "Molgen Genetics Haemostatic Disease (ITGA2/FVII) Kit" é um kit de ensaio para a deteção do polimorfismo de nucleótido único nos genes ITGA2 e F7 do sistema de coagulação sanguínea utilizando PCR em tempo real com deteção de curvas de fusão.
Introdução
o "Molgen Genetics Haemostatic Disease (ITGA2/FVII) Kit" destina-se à deteção do polimorfismo de nucleótido único C807T no gene ITGA2 (codifica a integrina alfa-2) e G10976A no gene F7 (codifica o fator VII da coagulação) em amostras clínicas (sangue total, epitélio bucal) utilizando o método da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real com análise da curva de fusão.
Os resultados da genotipagem são tidos em conta na avaliação complexa do risco de trombofilia (suscetibilidade à trombofilia hereditária).
A extração de ADN de amostras clínicas pode ser realizada utilizando o "Molgen Universal Extraction Kit".
O kit destina-se a ser utilizado com o ciclador de PCR de tipo bloco CFX96 (Bio-Rad, EUA), como o Adaltis AmpliLab
O kit contém os reagentes necessários para 48 testes, incluindo amostras de controlo.
Princípio do método
O princípio do método baseia-se na amplificação da região de ADN humano selecionada com a subsequente formação de duplexes híbridos do produto de PCR com a sonda de ADN específica e a deteção de curvas de fusão dos duplexes.
A etapa de amplificação consiste em ciclos repetidos: desnaturação térmica do modelo de ADN, recozimento dos iniciadores em locais específicos do modelo de ADN e extensão dos iniciadores com Taq polimerase.
Após a etapa de amplificação, a temperatura é reduzida e a sonda específica de ADN marcada com fluorescência hibridiza com o produto da amplificação marcado com um inibidor, o que resulta na diminuição do sinal fluorescente.
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