o "Molgen Genetics Haemostatic Disease (PAI-1/ITGB3) Kit" é um kit de ensaio para a deteção de polimorfismo de nucleótido único nos genes PAI-1 e ITGB3 do sistema de coagulação sanguínea utilizando PCR em tempo real com deteção de curvas de fusão.
Introdução
o "Molgen Genetics Haemostatic Disease (PAI-1/ITGB3) Kit" destina-se à deteção do polimorfismo de nucleótido único 5G(-675)4G no gene PAI-1 (codifica a serpina 1, inibidor endotelial do ativador do plasminogénio) e T1565C no gene ITGB3 (codifica a integrina beta-3, uma parte do recetor do fibrinogénio) em amostras clínicas (sangue total, epitélio bucal) utilizando o método da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real com análise da curva de fusão.
Os resultados da genotipagem são tidos em conta na avaliação complexa do risco de trombofilia (suscetibilidade à trombofilia hereditária).
A extração de ADN de amostras clínicas pode ser realizada utilizando o "Molgen Universal Extraction Kit".
O kit destina-se a ser utilizado com o ciclador de PCR de tipo bloco CFX96 (Bio-Rad, EUA), como o Adaltis AmpliLab.
O kit contém os reagentes necessários para 48 testes, incluindo amostras de controlo.
Princípio do método
O princípio do método baseia-se na amplificação da região de ADN humano selecionada, com a subsequente formação de duplexes híbridos do produto de PCR com a sonda de ADN específica e a deteção de curvas de fusão dos duplexes.
A etapa de amplificação consiste em ciclos repetidos: desnaturação térmica do modelo de ADN, recozimento dos iniciadores em locais específicos do modelo de ADN e extensão dos iniciadores com Taq polimerase.
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