Para a determinação quantitativa de UREA no soro. Apenas para utilização em diagnóstico in vitro.
Metodologia
Talke e Schubert introduziram um procedimento totalmente enzimático em 1965, utilizando urease e glutamato desidrogenase. O presente procedimento baseia-se numa modificação do seu método.
Preparação dos reagentes
Preparar o reagente de trabalho misturando 4 partes do reagente 1 com 1 parte do reagente 2 (por exemplo, 200 µL de R1 com 50 µL de reagente R2)
Deterioração do reagente
O reagente não deve ser utilizado se o reagente de trabalho apresentar uma absorvância do branco de reagente inferior a 1,0 a 340 nm.
Precauções
1. Este reagente destina-se apenas a utilização em diagnóstico in vitro.
2. Evitar a ingestão do reagente, uma vez que a toxicidade ainda não foi determinada.
3. Os reagentes contêm azida de sódio (0,2%) como conservante
Colheita e armazenamento de amostras
1. Recomenda-se a utilização de soro.
2. Não deve ser utilizado plasma que contenha anticoagulantes.
3. Todos os materiais que entrem em contacto com a amostra devem estar isentos de amoníaco e de metais pesados. 5. Todas as amostras de sangue devem ser consideradas potencialmente infecciosas.
Materiais necessários mas não fornecidos
1. Dispositivos de pipetagem precisos. (10ul e 1,0ml)
2. Temporizador. (Capaz de medir intervalos de 30 e 60 segundos)
3. Tubos de ensaio
4. Espectrofotómetro com uma cuvete de temperatura controlada capaz de medir a 340nm
PROCEDIMENTO
Comprimento de onda: 340 nm
Temperatura : 37°C
Percurso ótico : 1 cm
Tipo de ensaio : Tempo fixo
Direção da reação : Decrescente
1. Levar à temperatura ambiente ( 15 -30 °C)
2. Colocar o fotómetro a 0 (zero) com água destilada.
Limitações
As amostras com valores superiores a 250 mg/dL devem ser diluídas com soro fisiológico a 0,9% 1:1, ensaiadas de novo e os resultados multiplicados por dois.
---