Para a determinação quantitativa da Alanina Aminotransferase no soro.
METODOLOGIA
A Federação Internacional de Química Clínica (IFCC) publicou uma proposta de método recomendado em 1980, utilizando o ensaio acoplado LDH-NADH. O procedimento aqui descrito baseia-se nesse método.
Princípio
A ALT catalisa a transferência do grupo amino da L-alanina para -cetoglutarato, resultando na formação de piruvato e L-glutamato. A lactato desidrogenase catalisa a redução do piruvato e a oxidação simultânea do NADH em NAD. A taxa de diminuição da absorvância resultante é diretamente proporcional à atividade da ALT.
PREPARAÇÃO DE REAGENTES
Preparar o reagente de trabalho misturando 4 partes de reagente R1 com 1 parte de reagente R2.
(por exemplo, 200 µL de R1 com 50 µL de reagente R2)
DETERIORAÇÃO DO REAGENTE
Não utilizar o reagente se:
1. A absorvância inicial a 340nm for inferior a 0,8.
2. O reagente não cumpre os parâmetros de desempenho declarados.
PRECAUÇÕES
1. Este conjunto de reagentes destina-se apenas a utilização em diagnóstico in vitro.
2. O reagente R1 contém azida de sódio como conservante. Não ingerir.
RECOLHA E CONSERVAÇÃO DE AMOSTRAS
1. Recomenda-se a utilização de soro não hemolisado. Os glóbulos vermelhos contêm ALT, que pode dar resultados falsamente elevados.
2. A ALT no soro é estável durante três dias à temperatura ambiente (15-30°C), 1 semana a 4°C.
PROCEDIMENTO
Comprimento de onda: 340 nm
Tipo de ensaio : Cinético
Direção da reação : Decrescente
Temperatura : 37°C
Percurso ótico : 1 cm
1. Colocar à temperatura ambiente ( 15 -30 °C)
2. Colocar o fotómetro a 0 (zero) com água destilada
3. Misturar e incubar a 37 °C
4. Após 60 segundos, ler e registar a absorvância
5. Voltar a colocar o tubo a 37 °C.
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