Para a determinação quantitativa da transferrina no soro humano .
Princípio :
Os anticorpos antitransferrina, quando misturados com amostras que contêm transferrina, formam complexos insolúveis. Estes complexos provocam uma alteração da absorvância, dependente da concentração de transferrina da amostra do doente, que pode ser quantificada por comparação com um calibrador de concentração conhecida de transferrina.
REAGENTES
R1 (DILUENTE): Tampão Tris 20 mmol/L, PEG 8000, pH 8,3
R2 (ANTIBORPO): Soro de cabra anti-humano transferido, pH 7,5. Azida de sódio 0,95 g/L
CALIBRAÇÃO (Opcional) Recomenda-se o Calibrador de Proteínas do Soro.
PREPARAÇÃO DOS REAGENTES
Os reagentes estão prontos a utilizar.
PROCEDIMENTO
Comprimento de onda: 340 nm (320-360 nm)
Temperatura de trabalho : 37°C
Percurso ótico : 1 cm
Tipo de ensaio : Turbidimetria
Direção : Crescente
1. Colocar os reagentes e o fotómetro (suporte de cuvetes) a 37°C .
2. Ajustar o instrumento ao zero com água destilada.
3. Pipetar para um tubo de ensaio
4. Misturar e ler a absorvância (Abs.1) após a adição da amostra ou do calibrador.
5. Pipetar para um tubo de ensaio
6. Misturar bem e ler a absorvância (Abs.2) dos calibradores e da amostra exatamente 2 minutos após a adição de R2 .
CÁLCULO
Calcular a diferença de absorvância (Abs.2-Abs.1) de cada ponto da curva de calibração e representar graficamente os valores obtidos em função da concentração de transferrina de cada diluição do calibrador. A concentração de transferrina na amostra é calculada por interpolação da sua (Abs.2Abs.1) na curva de calibração.
CONTROLO DE QUALIDADE
Recomenda-se o controlo das proteínas do soro para monitorizar o desempenho dos procedimentos de ensaio manuais e automatizados.
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