Reagente em solução Ponceau S

solução de coloraçãomarcador de peso molecular de proteínaspara western blot

A solução de coloração Ponceaus S é uma coloração de membrana pronta a utilizar para avaliar a eficiência de transferência de um western blot. Esta coloração é recomendada para a coloração rápida e reversível de proteínas em membranas de nitrocelulose ou PVDF. A coloração com Ponceau S é reversível e pode ser removida com uma breve incubação em NaOH a 0,1%. A solução de Ponceau S pode ser utilizada para avaliar a quantidade total de proteínas ou a eficiência de transferência em membranas de nitrocelulose e PVDF. A membrana PVDF foi corada com Ponceau S durante 5 minutos e lavada com ddH2O durante 3 minutos. A membrana apresenta bandas cor-de-rosa visíveis. Faixa 1, 13: Escada de proteínas pré-colorada #PM019-0500 Pistas 2-7: Diluições 2X da escada de proteínas não coradas #PMU12-0500 Pistas 8-12: 2000, 1000, 500, 100, 50 ng de BSA Materiais necessários mas não fornecidos Recipiente: caixa para coloração do gel Agitador: agitador orbital ou de balanço Preparação da reação Depois de o gel SDS-PAGE ter sido transferido para uma membrana de nitrocelulose ou PVDF, colocar a membrana transferida num recipiente de coloração. Submergir a membrana numa quantidade adequada de solução de coloração de proteínas Ponceau S, suficiente para cobrir toda a membrana. Agitar ligeiramente o recipiente de coloração durante 5 a 15 minutos à temperatura ambiente. As bandas de proteínas serão coradas e começarão a tornar-se visíveis dentro de 5 a 15 minutos. Lavar o excesso de coloração na membrana com água desionizada até as bandas de proteínas ficarem claras. Para o passo seguinte de bloqueio da membrana, remover a solução de coloração Ponceau S da membrana, colocando a membrana em 20 ml de NaOH a 0,1% durante 1 a 2 minutos e depois enxaguar em água desionizada durante 1 a 2 minutos.