Kit de reagentes transcriptase reversa RScript™

corantepara síntese de DNAc

Este kit foi desenvolvido com base na transcriptase reversa RScript II, que utiliza um iniciador de transcrição reversa com uma estrutura de laço de haste que se liga à extremidade 3' da molécula de miRNA. Sob a ação da transcriptase reversa RScript II, obtém-se o cDNA de primeira cadeia do miRNA artificialmente alongado. A sequência geral recomendada para o stem-loop é 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC-3'; podem também ser selecionadas outras sequências de stem-loop em função das necessidades experimentais. Normalmente, os iniciadores de transcrição reversa apenas necessitam de adicionar 6 bases complementares reversas na extremidade 3' do miRNA à sequência do stem-loop. Este método é altamente específico e só efectua a transcrição reversa nos miRNAs maduros, sem interferência dos seus precursores. Os miRNAs com sequências altamente homólogas podem ser distinguidos com exatidão. Os produtos da transcrição reversa obtidos com este produto podem ser diretamente utilizados para a subsequente deteção quantitativa por métodos de corantes ou sondas. Teste de sensibilidade do RK004-0050 O RK004-0050 foi testado com diferentes concentrações (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng) de ARN de células Hela como modelos, tendo como alvo o gene has-mir16-5p. As curvas de amplificação demonstraram uma sensibilidade tão baixa como 10 pg de ARN total Desempenho de amplificação do RK004-0050 em modelos de diferentes fontes (A) ARN de células Hela (B) ARN de ratinho O RK004-0050 foi utilizado com diferentes concentrações (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng) de ARN de células Hela e de ARN de ratinho como modelos. As curvas de amplificação para vários miRNAs mostraram um excelente desempenho para Human-U6, has-mir16-5p, has-mir221-3p, Mouse-U6, mmu-mir-5p, mmu-mir24-3p, entre outros.