Reagente solução de coloração Luxol fast blue Kluwer Barrera

para citologiapara histologia

Preparado para o processamento de amostras cito-histológicas a examinar em microscopia ótica. Método indicado para a demonstração da mielina e de fosfolípidos em secções histológicas. PRINCÍPIO O Luxol azul rápido é um corante quimicamente derivado da tetrabenzotetrazo-porfirina. Klüver demonstrou a afinidade seletiva das porfirinas com a mielina. Pensa-se que a eletividade do corante para o sistema nervoso central se deve principalmente às ligações que forma com estruturas fosfolipídicas, tais como a lecitina e a esfingomielina. Utilizando este método não é necessário submeter o tecido a cromação antes da coloração. MÉTODO 1) Desparafine e hidrate a secção com etanol 95°. 2) Prepare a câmara húmida molhando com água destilada o filtro situado na cápsula Petri, insira a lâmina no suporte e, depois, deite 10 gotas do reagente A na secção; feche logo a tampa da cápsula e incube na estufa a 56 °C durante uma noite. 3) Retire a lâmina da câmara húmida e lave-a em etanol 95° (também se deverão dissolver os resíduos cristalizados do reagente A). 4) Lave em água destilada. 5) Deite na secção 10 gotas do reagente B: deixe atuar durante 30 segundos. 6) Diferencie em etanol 70° até obter as fibras mielínicas a azul sobre um fundo quase incolor (se a diferenciação for difícil, repita a passagem desde o ponto 5 durante 30 segundos e coloque novamente o preparado em etanol 70°). 7) Lave bem em água destilada (pelo menos 2 mudas). 8) Prepare novamente a câmara húmida; deite no preparado 10 gotas do reagente C e 5 gotas do reagente D, incube a 56 °C durante 20 minutos.