O NGS DNA Library Prep Kit sem PCR foi desenvolvido para a construção de bibliotecas de ADN para sequenciação de nova geração (plataforma illumina). O kit adiciona adaptadores de biblioteca com cauda 3′-dT a ambas as extremidades dos fragmentos de ADN de forma eficiente. O kit utiliza fragmentos de ADN de cadeia dupla (cegos e/ou pegajosos) como ADN de entrada para a construção de bibliotecas NGS e é compatível com fragmentos de ADN gerados a partir de métodos enzimáticos (enzimas de fragmentação de ADN BioDynami, etc.) e métodos físicos (sonicação, nebulização, etc.)
A amplificação por PCR é um passo padrão para a preparação de bibliotecas de sequenciação de nova geração. A PCR é utilizada para amplificar fragmentos de ADN totalmente ligados e para adicionar informações de indexação às bibliotecas. A indexação destina-se a agrupar as amostras da biblioteca, num esforço para reduzir o custo da sequenciação.
No entanto, a PCR introduz uma amplificação desigual do ADN nalgumas regiões do ADN com teores extremos de GC e estruturas secundárias. Este enviesamento pode causar uma cobertura de sequenciação muito baixa nessas regiões. A sequenciação de ADN nestas regiões continua a ser um enorme desafio.
A preparação de bibliotecas sem PCR pode reduzir o enviesamento da biblioteca e minimizar as lacunas de sequenciação. Os dados de sequenciação de amostras de bibliotecas sem PCR têm uma cobertura genómica uniforme com poucas lacunas e uma melhor profundidade nas regiões ricas em GC. O nosso kit NGS sem PCR oferece uma cobertura óptima nas regiões que são tradicionalmente difíceis, tais como regiões com elevado teor de GC, regiões com baixo teor de GC e regiões de sequências repetitivas.
Estão disponíveis dois tipos de índices para o kit:
Sem índice: As bibliotecas não têm índice.
Índice: Cada biblioteca contém um índice i5 e um índice i7. É possível a multiplexagem de bibliotecas até 96 amostras. A lista de índices pode ser descarregada aqui.
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