Kit de reagentes para preparação de bancos de DNA 3010 series

com enzimassolução tampãode conversão por bissulfito

A sequenciação por bissulfito é uma tecnologia bem conhecida para detetar a metilação do ADN e várias tecnologias, como WGBS, RRBS, MeDIP-Seq e MSBS, são utilizadas para a análise da metilação do ADN do genoma completo. A metilação do ADN é importante para a regulação do desenvolvimento celular, da diferenciação e da expressão genética em biologia molecular, genética e epigenética. A maioria das citosinas metiladas encontra-se em sítios CpG, e 70-80% das citosinas são metiladas. O número de sítios CpG no genoma humano é de cerca de 28 milhões, o que representa menos de 1% do genoma, em comparação com os 4,4% previstos. A sequenciação do genoma completo com bissulfito (WGBS) é o método mais eficaz de análise da metilação do ADN. A única limitação é o facto de o custo da sequenciação ser muito elevado, uma vez que todo o genoma é sequenciado, incluindo todas as regiões não metiladas. A sequenciação com bissulfito de representação reduzida (RRBS) consiste na representação reduzida de uma fração mais pequena dos sítios CpG metilados. A RRBS combina a digestão com enzimas de restrição e a sequenciação com bissulfito, enriquecendo a sequenciação para os sítios CpG metilados. Trata-se de uma tecnologia eficaz para estimar os padrões de metilação de todo o genoma ao nível de uma única base. Embora isto permita uma maior profundidade de cobertura e reduza o custo da sequenciação, a limitação é que apenas 10% dos sítios CpG metilados são cobertos. A Sequenciação por Imunoprecipitação de ADN Metilado (MeDIP-Seq) é outra técnica de enriquecimento do genoma completo utilizada para a seleção de ADN metilado. Utilizando anticorpos contra a 5-metilcitosina, o ADN metilado é enriquecido a partir de ADN genómico total através de imunoprecipitação. os anticorpos contra a 5-metilcitosina são incubados com ADN genómico fragmentado e precipitados, seguindo-se a purificação e sequenciação do ADN.