A biblioteca de fusão VENUS de S. cerevisiae consiste em estirpes que expressam dois fragmentos (VN ou VC) da proteína fluorescente VENUS ligados ao terminal C de cada proteína. A interacção de duas proteínas pode ser fácil e rapidamente analisada para todas as proteínas de levedura, e a interacção entre proteínas expressas em estado natural pode ser analisada utilizando o seu próprio promotor na célula.
Características e vantagens
Análise de interacções proteicas e localização intracelular em células vivas
Observação simples possível apenas com um microscópio de fluorescência
Fácil de estudar a função e a interacção de novas proteínas desconhecidas
Possibilidade de análise da proteinilação (ubiquitinação, sumoilação, neddilação, etc.)
Visão geral
A biblioteca de fusão VENUS de S. cerevisiae foi desenvolvida na Universidade Nacional de Seul (Biblioteca de fusão VN: Genome Res. 2013. 23:736-746 & VC-fusion Library: Genome Res. 2019. 29:135-145). A Bioneer detém a sua licença comercial exclusiva. A biblioteca de fusão VENUS consiste em estirpes de S. cerevisiae que expressam uma ORF que contém cada fragmento de VENUS (VN & VC) no terminal C. A proteína de fusão VN/VC foi inserida no cromossoma da levedura por recombinação homóloga e expressa utilizando o seu próprio promotor. A biblioteca VN é constituída por 5 809 estirpes e a biblioteca VC por 5552 estirpes, cobrindo mais de 90% do proteoma de S. cerevisiae. .
Princípio
Ensaio de Complementação de Fluorescência Bimolecular (BiFC)
Na técnica de complementação de fluorescência bimolecular (BiFC), uma proteína fluorescente (VENUS) é dividida em fragmentos N-terminal (VN) e C-terminal (VC) e depois ligada a cada uma das duas proteínas com as quais se pretende interagir e expressar.
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