Reagente anticorpos TurboGFP-Trap

para bioquímicapara imagiologia celularde proteínas

As proteínas de fusão fluorescentes são ferramentas populares para estudar a localização de proteínas e a dinâmica celular. Estas construções geralmente fundem a totalidade - ou pelo menos um domínio funcional - de uma proteína alvo com um dos muitos tipos de proteínas fluorescentes repórteres. A proteína verde fluorescente dimérica TurboGFP é derivada da proteína verde fluorescente CopGFP do copépode Pontellina plumata (Shagin et al., 2004). Possui uma fluorescência verde brilhante com um máximo de excitação a 482 nm e um máximo de emissão a 502 nm. A TurboGFP é uma proteína de maturação rápida - o seu sinal fluorescente no interior de uma célula é visível mais cedo do que o de outras proteínas fluorescentes verdes. A TurboGFP partilha apenas cerca de 20 % de identidade de sequência com as variantes da GFP das medusas. Por conseguinte, a maioria dos anticorpos anti-GFP não se liga à TurboGFP - incluindo o nosso nanocorpo GFP utilizado no GFP-Trap. É fácil obter imagens de células utilizando uma construção de proteína de fusão TurboGFP, embora para obter uma imagem completa esses dados de imagem sejam frequentemente combinados com informações bioquímicas adicionais para a proteína (ou domínio proteico) de interesse. Para essas experiências bioquímicas, é normalmente concebida uma segunda proteína de fusão utilizando um domínio "tag" diferente que permite a purificação. Estas análises in vitro adicionais podem ser utilizadas para confirmar a funcionalidade da construção de fusão "marcada", bem como para extrair complexos multiproteicos que se possam formar no meio celular. A falta de reagentes específicos, fiáveis e eficazes limitou a utilização de GFP e de proteínas de fusão fluorescentes relacionadas, tanto para estudos de biologia celular como para análises bioquímicas directas.