O Imunoensaio CBIACTH é um ensaio de dois locais lumELISA (Ensaio ImunoSorbente Ligado à Quimiluninescência) para a medição da cadeia de 39 aminoácidos biologicamente activos do ACTH. Um anticorpo policlonal de cabra para o ACTH, purificado por cromatografia de afinidade, e um anticorpo monoclonal de rato para o ACTH são específicos para regiões bem definidas na molécula ACTH. Um anticorpo está preparado para ligar apenas o C-terminal ACTH 34-39 e este anticorpo é biotinyado. O outro anticorpo está preparado para ligar apenas a região média e N-terminal ACTH 1-24 e este anticorpo é rotulado com peroxidase de rábano [HRP] para detecção. Neste ensaio, calibradores, controlos, ou amostras são simultaneamente incubados com a enzima rotulada anticorpo e um anticorpo acoplado à biotina num poço de microplaca revestido com estreptavidina. No final da incubação do ensaio, o micropoço é lavado para remover componentes não ligados. Após a adição do substrato de luminol, a actividade enzimática na fracção ligada à enzima é directamente proporcional à concentração do ACTH na amostra. É preparada uma curva padrão relacionando a unidade luminosa (RLU) com a concentração do ACTH. As concentrações de ACTH presentes nos controlos e nas amostras são determinadas directamente a partir desta curva.
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