O teste LAL baseia-se no facto de que a endotoxina bacteriana Gram-negativa catalisa a activação de uma pró-enzima. A taxa inicial de activação é determinada pela concentração de endotoxina presente. A enzima activada (coagulase) hidrolisa ligações específicas dentro de uma proteína coagulante (coagulogénio) que também está presente no LAL. Uma vez hidrolisada, a coagulase resultante auto-associa-se e forma um coágulo gelatinoso. A utilização do LAL para detectar endotoxina evoluiu da observação de que a infecção Gram-negativa de Limulus polyphemus resultou numa coagulação intravascular fatal.
---