A protease K é um protease endolytic que fenda ligações de peptide nos lados carboxylic de ácidos aminados alifáticos, aromáticos ou hidrofóbicas. A protease K é classificada como um protease do serine. O peptide o menor a ser hydrolyzed por esta enzima é um tetrapeptide.
Características
• Protease de recombinação K
• Ativo em uma vasta gama de produtos da reação
Aplicações
• Isolamento do ADN genomic das pilhas cultivadas e dos tecidos
• Remoção dos DNases e do RNases ao isolar o ADN e o RNA dos tecidos ou das linha celular
• Determinação da localização da enzima
• Melhorando a eficiência de clonagem de produtos do PCR
Controle da qualidade
Atividade do DNase: Nenhum atividade de enzima detectável após 6 horas de incubação com ADN do λ em 37ºC.
Atividade do RNase: Nenhum atividade detectável do ribonuclease após 16 horas de incubação com RNA em 25ºC.
Fonte
Das pilhas de fermento com o gene clonado que codifica genetically projetou o protease endolytic do álbum de Engyodontium (álbum de Tritirachium).
Peso molecular
monômero do kDa 29,3.
Definição da unidade de atividade
Uma unidade da enzima libera os ácidos aminados Folin-positivos e os peptides que correspondem a 1 tirosina do µmol em 1 minuto em 37°C, hemoglobina desnaturada de utilização do pH 7,5 como a carcaça.
A atividade de enzima é analisada na seguinte mistura: Fosfato do potássio de 0,08 M (pH 7,5), ureia de 5 M, 4 milímetros de NaCl, 3 milímetros de CaCl2 e 16,7 mg/ml hemoglobina.
Instruções da preparação
A solução conservada em estoque pode ser preparada como 40-80mg/ml no amortecedor da diluição [Tris-HCl de 20 milímetros (pH 7,4), 1 milímetro de CaCl2]