Reagente com enzimas A018 series

enzima UDGpara RT-qPCRde bactérias

A enzima UDG termogénica (uracil-DNA glicosilase) é rastreada, extraída e purificada a partir de bactérias cultivadas em laboratório e, à semelhança da UNG de E. coli, hidrolisa ligações uracil-glicosídicas em ADN de cadeia simples ou dupla, excisa o uracilo e produz sítios sem base sensíveis a álcalis no ADN. Estes locais sem base podem ser hidrolisados por endonuclease de ácido nucleico, aquecimento ou tratamento alcalino e, ao contrário da UNG de E. coli, a enzima apresenta baixa estabilidade térmica e, por conseguinte, é mais provável que seja inactivada. Dependendo da forma como o ADN é preparado, as enzimas UDG podem ser utilizadas para obter uma clivagem do ADN-U específica do local comum ou específica da cadeia. Definição da unidade Uma unidade é definida como a quantidade de uracil-DNA glicosilase necessária para degradar totalmente 1 μg de uracil-DNA de cadeia simples purificado (M13) em 60 minutos a 37 ° C.【Características do produto】 Os locais de U-DNA no DNA de fita simples e dupla podem ser hidrolisados, as ligações de glicosídeo uracil podem ser excisadas e locais livres de base sensíveis a álcalis podem ser produzidos no DNA. é activa tanto no ADN de cadeia simples como no de cadeia dupla. inactivo no ARN e no ADN naturalmente isento de uracilo. não são necessários iões metálicos e são totalmente activos na presença de EDTA. No entanto, a actividade residual em sistemas que excedam 100 mM de K+ ou Na+ é de aproximadamente 70% da actividade original e é necessária uma maior utilização. a temperatura ideal de reação é de 37 ° C, mas tem melhor atividade em uma ampla faixa de 20-50 ° C, e 95 ° C pode ser completamente inativado em 2 minutos. a quantidade recomendada de uso em PCR é 0,2U-1U / 25μl, e a quantidade recomendada de uso em RT-qPCR de uma etapa e 55-65 ° C não é mais do que 0,2U / 25 μl,