O método baseia-se na hidrólise do α-naftilfosfato a pH 5,0 pela fosfatase ácida (ACP) para produzir α-naftol e fosfato inorgânico. O pentanodiol actua como um aceitador de fosfato
aumentando a sensibilidade da reação.
O α-naftol reage com o Fast Red TR, produzindo um complexo colorido diretamente proporcional à atividade da ACP na amostra.
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