Este procedimento baseia-se num método enzimático melhorado, originalmente concebido para avaliar a creatinina no soro e na urina. O teste é efectuado em duas etapas. Na primeira etapa, a creatina é removida durante os primeiros minutos da fase de pré-incubação da amostra com creatinase. Na segunda etapa, a adição de creatininase, que actua também como iniciador da reação, hidrolisa a creatinina da amostra na presença de sarcosina oxidase (Sar OD) com produção de peróxido de hidrogénio.
Creatinina + H2O Creatina
Sarcosina + H2O + O2 H2O2 + Glicina + HCHO
O peróxido de hidrogénio produzido pela reação da oxidase é quantificado por uma reação do tipo Trinder, na qual o derivado cromogénico HTIB e a 4-aminoantipirina (4-AA) são condensados na presença de peroxidase (POD) para formar um corante vermelho quinoneimina.
4-AA + HTIB Quinoneimina vermelha + H2O
A velocidade de desenvolvimento da cor é proporcional à concentração de creatinina na amostra.
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