O método baseia-se na hidrólise enzimática dos triglicéridos do soro ou do plasma em glicerol e ácidos gordos livres (AGL) pela lipase lipoproteica (LPL). O glicerol é fosforilado por adenosina trifosfato (ATP) na presença de glicerolquinase (GK) para formar glicerol-3-fosfato (G-3-P) e adenosina difosfato (ADP).
O G-3-P é oxidado pela glicerofosfato oxidase (GPO) para formar fosfato de dihidroxiacetona (DHAP) e peróxido de hidrogénio.
É produzido um cromogénio vermelho pelo acoplamento catalisado pela peroxidase (POD) da 4-aminoantipirina (4-AA) e do fenol com peróxido de hidrogénio (H2O2), proporcional à concentração de triglicéridos na amostra.
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