Prepara o caminho para a análise funcional de uma questão de investigação específica.
Utilização prevista
Este kit FluoroSpot Path destina-se à contagem de células que segregam IFN-γ e IL-2 humanos em resposta a péptidos de TB utilizando o ensaio FluoroSpot. Apenas para utilização em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico.
Composição do pool de péptidos
Os pools de rastreio são constituídos por péptidos sintéticos de 15 mers que se sobrepõem a 11 aminoácidos, abrangendo as proteínas completas. O pool de rastreio ESAT-6 é derivado da proteína-alvo antigénica de secreção precoce e contém 21 péptidos. O scan pool CFP-10 é derivado da proteína do filtrado de cultura e contém 23 péptidos. Finalmente, o scan pool EspC é derivado da proteína associada à secreção ESX-1 e contém 23 péptidos.
Desempenho
As PBMC humanas (250 000 células/poço) de um indivíduo com tuberculose latente foram incubadas de um dia para o outro na ausência ou presença dos pools de rastreio ESAT-6 e CFP-10 (Mabtech). O número de células que segregam IFN-γ e/ou IL-2 foi analisado por FluoroSpot. Foram determinadas as células que segregam uma única citocina, bem como as células com dupla segregação. O Spot Center foi utilizado para identificar manchas de células com secreção dupla, visualizadas numa sobreposição de imagens de LED490, FITC (IFN-γ) e LED550,Cy3 (IL-2). A análise dos pontos foi efectuada com o Mabtech IRIS.
IFN-γ
Descrição do analito -
O interferão-γ (IFN-γ) é o único interferão de tipo II. Esta citocina pró-inflamatória é segregada por células T activadas e células NK. Ativa os macrófagos e as células endoteliais e regula as respostas imunitárias afectando as APC, as células T e as células B. A produção de IFN-γ por células T auxiliares e células T citotóxicas é uma caraterística do fenótipo do tipo Th1.
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