Prepara o caminho para a análise funcional de uma questão de investigação específica.
Utilização prevista
Este kit FluoroSpot Path destina-se à contagem de células B que segregam IgG humana em resposta ao SARS-CoV-2 (RBD) utilizando o ensaio FluoroSpot. As células B que segregam IgG, independentemente da especificidade do antigénio (IgG total), também podem ser enumeradas. Apenas para utilização em investigação. Não se destina a ser utilizado em procedimentos de diagnóstico.
Para células B de memória, recomenda-se a pré-estimulação com R848 e IL-2 humana recombinante (ambos incluídos).
Desempenho
As PBMC humanas de um indivíduo convalescente da COVID-19 foram incubadas na presença e ausência de R848+IL-2 (estimula as células B de memória) em tubos durante três dias. As células foram depois extensivamente lavadas e adicionadas a uma placa FluoroSpot (200 000 células/poço) revestida com mAbs IgG anti-humanos. As manchas específicas de RBD foram detectadas com RBD-WASP, ou seja, proteína recombinante do Domínio de Ligação ao Recetor com um marcador WASP, seguida de anti-WASP-640. As manchas foram analisadas com o Mabtech IRIS.
Descrição da substância a analisar
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A imunoglobulina G (IgG) é o isótipo de Ig mais abundante no soro, constituindo aproximadamente 80% de todas as imunoglobulinas séricas. Nos seres humanos, existem quatro subclasses de imunoglobulina G, com as concentrações séricas mais elevadas de IgG1, seguidas de IgG2, IgG3 e IgG4. Nos ratinhos, as subclasses de IgG são definidas como IgG1, IgG2a/c, IgG2b e IgG3. A molécula de IgG consiste em duas cadeias pesadas e duas cadeias leves (κ ou λ), resultando numa molécula com dois braços para ligação ao antigénio. Numa resposta imunitária típica a antigénios, são induzidos níveis elevados de anticorpos IgG após a resposta inicial de IgM.
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