Kit de reagentes para amplificação de DNA Ampli1 WGA PLUS

DNA polimeraseTaq polimeraseNGS

O kit Ampli1 WGA PLUS foi desenvolvido e optimizado para uma amplificação equilibrada e completa do conteúdo total de ADN de uma única célula humana. O ADN de entrada (de uma única célula e de até 1000 células em ~1 μI de PBS) pode ser derivado de células frescas/vidas e/ou fixadas (tubos PFA2%, CellSave, CellRescue). O kit também pode ser utilizado para amplificar até 10 ng de ADN genómico (por exemplo, a partir de amostras de tecido ou FFPE). Após a lise celular, o ADN é digerido com uma enzima de restrição e os adaptadores são ligados aos fragmentos de ADN. Isto assegura que, para qualquer locus no genoma, os alelos correspondentes são amplificados como fragmentos genómicos com o mesmo comprimento e conteúdo GC quase idêntico, reduzindo assim drasticamente a perda de alelos devido à diferente eficiência de amplificação das moléculas de ADN originais. A amplificação, realizada no mesmo tubo, é mediada por um único iniciador de PCR universal altamente específico para todos os fragmentos e utiliza uma polimerase de ADN com atividade de revisão de exonuclease 3'→5', com uma fidelidade 6,5X superior à da polimerase de ADN Taq padrão. O resultado do protocolo Ampli1 WGA é uma biblioteca bem equilibrada de fragmentos de cerca de 0,2-2 kb que representam todo o genoma. Muitos tipos diferentes de procedimentos de análise a jusante são compatíveis com o produto Ampli1 WGA PLUS, tais como a deteção de variantes por Sanger ou sequenciação de nova geração (NGS), microssatélite ou outra análise de genotipagem baseada em PCR, CGH metafásico, CGH de matriz e análise do número de cópias em todo o genoma por NGS. Dois kits a jusante dedicados, Ampli1 OncoSeek Panel e Ampli1 LowPass Kit para Illumina,