Kit de reagentes em solução Ext-RNA

para pesquisade genes

O ERCC RNA Spike-in Control Mixes foi desenvolvido pelo National Institute of Standards and Technology (NIST) e é composto por uma série de sequências de ARN com concentrações determinadas. Pode derivar curvas padrão que relacionam as contagens de leituras com a concentração de ARN e é amplamente utilizada na avaliação do desempenho de experiências de expressão genética. O Ext-RNA Control Panel v1.0 visou 24 dos 92 transcritos ERCC com 273-2 022 pb de comprimento, com concentrações que variam entre 0,014305 attomol/μL e 937,5 attomol/μL. Os 24 RNAs ERCC servirão como controlos externos para a quantificação da expressão de RNA. As amostras de ARN podem ser utilizadas diretamente para a preparação de bibliotecas com este kit? Não. Este kit é compatível apenas com gDNA ou cDNA como amostras iniciais. Para as amostras de ARN, é necessária a transcrição inversa para gerar cADN antes da preparação da biblioteca. Qual é o intervalo de entrada recomendado? Como lidar com entradas que excedam este intervalo? Este kit suporta 50-2.000 ng de gDNA ou cDNA. Se a quantidade de entrada exceder 2.000 ng, dividir a amostra em várias reacções para manter a eficiência da amplificação. Qual é o tamanho da inserção deste kit? Como selecionar o comprimento da leitura de sequenciação? O pico principal dos produtos PCR utilizando este kit é de ~270 bp. A sequenciação PE150 é recomendada para uma cobertura de alta qualidade. Qual é o volume de dados de sequenciação recomendado para a análise do repertório imunitário IGTR? Recomenda-se um mínimo de 0,3 Gb para detetar clones a 0,01% de abundância com uma entrada de 200 ng. Aumente o volume de dados para aumentar a sensibilidade para clones de baixa frequência. Este kit é adequado para a monitorização da doença residual mínima (DRM)? Sim. Este kit inclui IG Primer Mix e TR Primer Mix com primers específicos do gene fornecidos em tubos separados,