O NZY First-Strand cDNA Synthesis Kit, oligos separados, é um sistema que inclui todos os componentes necessários para sintetizar cDNA de primeira cadeia. O kit permite a reação a altas temperaturas, o que é benéfico quando se parte de ARN difícil e complexo.
Detalhes
O NZY First-Strand cDNA Synthesis Kit, oligos separados, é um sistema que inclui todos os componentes necessários para sintetizar cDNA de primeira cadeia, exceto o RNA modelo. Os hexâmeros aleatórios e os primers Oligo(dT)18 são fornecidos em tubos separados para oferecer a conveniência de escolher o primer adequado para iniciar a sua reação de transcrição reversa. O cDNA de cadeia simples resultante é adequado para utilização em PCR de transcrição reversa quantitativa em tempo real (RT-qPCR). O kit NZY First-Strand cDNA Synthesis Kit, oligos separados, foi formulado para proporcionar elevados rendimentos de produtos de cDNA de comprimento total e para aumentar a sensibilidade na RT-qPCR. O material de partida pode variar entre 10 pg e 5 µg de ARN total. Para além dos hexâmeros aleatórios e dos iniciadores Oligo(dT)18, o kit inclui o NZYRT 2× Master Mix, sem oligos, que contém dNTPs, MgCl2 e um tampão RT optimizado; o 10× Annealing Buffer e o NZYRT Enzyme Mix. A mistura enzimática NZYRT inclui a transcriptase reversa NZY (RNase H menos) e o inibidor de ribonuclease NZY para proteger o ARN contra a degradação devida à contaminação por ribonuclease. A RNase H (de E. coli) é fornecida num tubo separado para degradar especificamente o RNA G604template em híbridos cDNA-RNA após a síntese de cDNA de primeira cadeia. Este procedimento melhorará a sensibilidade das reacções subsequentes de RT-qPCR, uma vez que os iniciadores de PCR se ligarão mais facilmente ao cADN.
Componentes
- Mistura de enzimas NZYRT
- NZYRT 2x Master Mix, sem oligos
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