O NZY M-MuLV First-Strand cDNA Synthesis Kit é um sistema que inclui todos os componentes necessários para sintetizar cDNA de primeira cadeia, exceto o modelo de ARN.
Detalhes
O NZY M-MuLV First-Strand cDNA Synthesis Kit, oligos separados, é um sistema que inclui todos os componentes necessários para sintetizar cDNA de primeira cadeia, exceto o RNA modelo. Os hexâmeros aleatórios e os primers Oligo(dT)18 são fornecidos em tubos separados para oferecer a conveniência de escolher o primer adequado para iniciar a sua reação de transcrição reversa. O cDNA de cadeia simples resultante é adequado para utilização em PCR de transcrição reversa quantitativa em tempo real (RT-qPCR). O kit NZY M-MuLV First-Strand cDNA Synthesis Kit, oligos separados, foi formulado para proporcionar elevados rendimentos de produtos de cDNA de comprimento total e para aumentar a sensibilidade na RT-qPCR. O material de partida pode variar entre 10 pg e 5 µg de ARN total. Para além dos hexâmeros aleatórios e dos primers Oligo(dT)18, o kit inclui o NZYRT 2× Master Mix, sem oligos, que contém dNTPs, MgCl2 e um tampão RT optimizado; 10× Annealing Buffer e NZYM-MuLV RT Enzyme Mix. A mistura enzimática NZYM-MuLV RT inclui a transcriptase reversa NZY M-MuLV (RNase H menos) e o inibidor de ribonuclease NZY, a fim de proteger o ARN contra a degradação devida à contaminação por ribonuclease. A RNase H (de E. coli) é fornecida num tubo separado para degradar especificamente o modelo de ARN em híbridos de ARN-CDNA após a síntese da primeira cadeia de ARN-CDNA. Este procedimento melhorará a sensibilidade das reacções RT-qPCR subsequentes, uma vez que os iniciadores de PCR se ligarão mais facilmente ao cDNA.
Componentes
- Mistura de enzimas NZYM-MuLV RT
- NZYRT 2x Master Mix, sem oligos
- Tampão de recozimento 10×
- Mistura de hexâmeros aleatórios (50 ng/µL)
---