O kit de mutagénese NZYSupreme foi concebido para efetuar mutações pontuais e eliminar ou inserir nucleótidos simples ou múltiplos numa sequência de ADN. O sistema requer o fornecimento de dois primers de oligonucleótidos sintéticos que contenham a mutação desejada.
Detalhes
O kit de mutagénese NZYSupreme fornece um método simples e altamente eficiente para gerar mutações pontuais ou para eliminar/inserir nucleótidos simples ou múltiplos em qualquer tipo de ADN plasmídico utilizando PCR. Este kit de mutagénese foi recentemente desenvolvido para reduzir o tempo de trabalho e aumentar a eficiência da edição do ADN. O sistema requer o fornecimento de dois primers sintéticos de oligonucleótidos parcialmente complementares que contenham a mutação desejada. A incorporação destes primers de oligonucleótidos mutados com a Supreme NZYProof DNA polimerase, uma polimerase de alta precisão, gera um plasmídeo mutado com nicks escalonados, que resiste à digestão por Dpn I (uma vez que o ADN sintético não está metilado). Após o tratamento com Dpn I, o plasmídeo mutado resultante é recuperado através da transformação de células competentes NZYStar. Para uma apresentação esquemática do protocolo de mutagénese, ver a Figura 1. O ADN isolado de estirpes de Escherichia coli danificadas, incluindo JM101 e SCS110, não é um modelo adequado para a reação de mutagénese.
Componentes
- Supreme NZYProof 2x Colourless Master Mix
- Dpn I (10 U/µL)
- Plasmídeo de controlo
- Mistura de primers de controlo da mutagénese
- Células competentes Plasmídeo de controlo (0,1 ng/µL) (*)
(*) fornecido apenas no kit MB44702
Mais informações
Condições de envio
Gelo seco
Aplicação
Mutagénese dirigida ao local
Características
Mutagénese de plasmídeos <15 kb; Rápida
Categoria do produto
Clonagem de ADN e Mutagénese
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