Medido pela sua capacidade de hidrolisar o grupo 5'-fosfato do substrato adenosina-5'-monofosfato (AMP). O produto ortofosfato é medido por um kit de deteção de fosfato verde de malaquite. A atividade específica é >12.500 pmol/min/μg, medida nas condições descritas.
Sequência N-terminal
Análise - Trp27
Massa molecular prevista - 85 kDa
SDS-PAGE - 84-93 kDa sob condições redutoras.
Sem transportador
O que significa CF?
CF significa Carrier Free (CF). Normalmente, adicionamos Albumina de Soro Bovino (BSA) como proteína transportadora às nossas proteínas recombinantes. A adição de uma proteína transportadora melhora a estabilidade da proteína, aumenta o prazo de validade e permite que a proteína recombinante seja armazenada numa concentração mais diluída. A versão sem transportador não contém BSA.
Qual é a formulação correcta para mim?
Em geral, aconselhamos a compra da proteína recombinante com BSA para utilização em cultura de células ou tecidos, ou como padrão ELISA. Em contrapartida, a proteína sem transportador é recomendada para aplicações em que a presença de BSA possa interferir.
Procedimento de ensaio
Materiais
Tampão de ensaio: 25 mM Tris, 5 mM MgCl2, pH 7,5
Quimera 5'-Nucleotidase/CD73 Fc humana recombinante (rhCD73/mFc)
Substrato: Adenosina monofosfato (AMP), 5 mM de stock em água desionizada
Kit de deteção de fosfato verde de malaquite
placa transparente de 96 poços
Leitor de placas com capacidade de leitura de absorvância
Preparar uma curva padrão a partir do padrão de fosfato 1 M adicionando 10 µL do padrão de fosfato 1 M a 990 µL de tampão de ensaio para obter um stock de 10 mM. Continuar adicionando 10 µL do stock de fosfato 10 mM a 990 µL de tampão de ensaio para obter um stock de 100 µM (esta é a primeira diluição a utilizar como padrão).
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