Este kit HTRF detecta STAT6 celular e pode ser utilizado como um ensaio de normalização com o nosso kit fosfo-STAT6 para uma leitura óptima da sinalização JAK/STAT.
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O kit de ensaio celular Total STAT6 foi concebido para monitorizar o nível de expressão de STAT6, quer fosforilado quer não fosforilado. É compatível com o nosso kit Phospho-STAT6 e permite a análise de proteínas fosforiladas e totais a partir de uma única amostra para uma melhor leitura da via de sinalização JAK/STAT.
Especificações
Outras especificações
Tamanho da unidade 500 pontos de ensaio
Como funciona
Princípio do ensaio Total STAT6
O ensaio Total STAT6 quantifica o nível de expressão de STAT6 num lisado celular. Ao contrário do Western Blot, o ensaio é inteiramente baseado em placas e não requer géis, eletroforese ou transferência. O ensaio Total-STAT6 utiliza dois anticorpos marcados: um acoplado a um fluoróforo dador e o outro a um aceitador. Ambos os anticorpos são altamente específicos para um epítopo distinto na proteína. Na presença de STAT6 num extrato celular, a adição destes conjugados coloca o fluoróforo dador em estreita proximidade com o aceitador, gerando assim um sinal FRET. A sua intensidade é diretamente proporcional à concentração da proteína presente na amostra e proporciona um meio de avaliar a expressão das proteínas num formato de ensaio sem lavagem.
Protocolo do ensaio em 2 placas Total STAT6
O protocolo de 2 placas envolve a cultura de células numa placa de 96 poços antes da lise, transferindo depois os lisados para uma placa de deteção de baixo volume de 384 poços antes da adição dos reagentes de deteção Total-STAT6 HTRF. Este protocolo permite monitorizar a viabilidade e a confluência das células.
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