Reagente para detecção de micoplasma MB000-1591

anticorpo monoclonalcom enzimasantibiótico

Mycoplasma: Também conhecido como mycoplasma, o menor e mais simples organismo procariótico jamais descoberto, estima-se que 15% a 35% das células estão contaminadas com o mycoplasma. A contaminação com micoplasma pode ter muitos efeitos nas células, incluindo propriedades metabólicas, imunitárias ou bioquímicas, estado de crescimento, e sobrevivência celular, afectando a estabilidade, fiabilidade, e precisão dos resultados experimentais; o micoplasma é difícil de detectar, e é difícil de eliminar, pode facilmente passar o filtro padrão 0.22μm, e pode também antagonizar a maioria dos antibióticos, causando enormes perdas na cultura celular. Por conseguinte, as células precisam de ser testadas regularmente para a contaminação por micoplasma (por exemplo, a cada 2 a 3 meses). Estão disponíveis vários métodos para detectar o micoplasma, incluindo caldo ou cultura de ágar, coloração fluorescente directa ou indirecta, ELISA, PCR directa ou indirecta, etc., em que a PCR directa é altamente sensível. Para assegurar a exactidão dos resultados da PCR, para evitar a amplificação e contaminação não específica por PCR, as medidas comuns são a utilização de enzima Taq de arranque a quente e UDG (uracil-DNA glicosilase). O centro activo da enzima Taq quimicamente modificada é bloqueado de modo a que a enzima não esteja activa a baixa temperatura ou temperatura normal, de modo a que não seja gerada uma amplificação não específica devido à inadequação dos iniciadores antes do carregamento para a amplificação PCR. A temperaturas elevadas (como 95°C), os grupos quimicamente modificados irão hidrolisar e libertar todas as actividades enzimáticas, conseguindo assim o arranque a quente da enzima Taq. Minimizar a amplificação não específica e a formação de dímeros primários, e aumentar a sensibilidade e especificidade da amplificação.